皮膚傷口一般通過(guò)形成疤痕來(lái)愈合，這是一種由表達(dá)Engrailed-1（En1）基因的成纖維細(xì)胞譜系介導(dǎo)的纖維化過(guò)程。疤痕在三個(gè)方面與正常未受傷的皮膚不同：(i) 它們?nèi)狈γ?、皮脂腺和其他真皮附屬物（dermal appendage）；(ii) 它們含有密集的、平行的細(xì)胞外基質(zhì)纖維，而不是未受傷皮膚的“籃筐編織（basket-weave）”模式；(iii) 由于這種基質(zhì)結(jié)構(gòu)的改變，它們?nèi)狈ζつw的正常彈性和強(qiáng)度。一種成功的疤痕療法將通過(guò)促進(jìn)真皮附屬物的重新生長(zhǎng)、正常的基質(zhì)超微結(jié)構(gòu)的重建和機(jī)械強(qiáng)度的恢復(fù)來(lái)解決這三個(gè)差異。然而，人們對(duì)阻礙出生后皮膚再生性愈合反應(yīng)的細(xì)胞和分子機(jī)制知之甚少，也不知道是否可以通過(guò)調(diào)節(jié)特定的成纖維細(xì)胞譜系來(lái)繞過(guò)這些機(jī)制。
在一項(xiàng)新的研究中，來(lái)自美國(guó)斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院的研究人員想要了解疤痕成纖維細(xì)胞（scarring fibroblast, ，也稱為瘢痕成纖維細(xì)胞）是否純粹來(lái)自于未受傷皮膚中現(xiàn)有的En1陽(yáng)性成纖維細(xì)胞的擴(kuò)增，或者En1陽(yáng)性疤痕成纖維細(xì)胞是否可以通過(guò)激活出生后的En1陰性成纖維細(xì)胞在傷口微環(huán)境（wound niche）中的En1表達(dá)而從新產(chǎn)生。相關(guān)研究結(jié)果發(fā)表在2021年4月23日的Science期刊上，論文標(biāo)題為“Preventing Engrailed-1 activation in fibroblasts yields wound regeneration without scarring”。
這些作者使用成纖維細(xì)胞移植以及轉(zhuǎn)基因小鼠模型來(lái)追蹤En1在空間時(shí)間上的表達(dá)。他們研究了成纖維細(xì)胞對(duì)體外和體內(nèi)機(jī)械力的反應(yīng)，以建立一種將皮膚張力與出生后的En1表達(dá)聯(lián)系起來(lái)的機(jī)械傳導(dǎo)機(jī)制。接著，他們用化學(xué)方法（通過(guò)使用維替泊芬）和轉(zhuǎn)基因方法抑制機(jī)械傳導(dǎo)信號(hào)[利用白喉毒素剔除表達(dá)En1的成纖維細(xì)胞，通過(guò)將編碼YAP的DNA序列放入兩個(gè)loxP位點(diǎn)之間實(shí)現(xiàn)YAP基因敲除]來(lái)調(diào)節(jié)傷口愈合期間的En1表達(dá)。他們通過(guò)RNA測(cè)序、定量組織病理學(xué)比較（使用自定義圖像處理算法）和機(jī)械強(qiáng)度測(cè)試，將實(shí)驗(yàn)性傷口與未受傷的皮膚和疤痕（使用磷酸鹽緩沖鹽水作為對(duì)照）進(jìn)行比較。
成纖維細(xì)胞移植和譜系追蹤研究顯示，網(wǎng)狀真皮層的En1陰性成纖維細(xì)胞（ENF）在傷口微環(huán)境中激活En1，產(chǎn)生了大約40%～50%的疤痕成纖維細(xì)胞。這一現(xiàn)象取決于機(jī)械線索：在軟基質(zhì)上培養(yǎng)的ENF細(xì)胞或用機(jī)械信號(hào)蛋白（比如YAP）的化學(xué)抑制劑處理的ENF細(xì)胞不會(huì)激活En1。通過(guò)RNA測(cè)序?qū)Ρ磉_(dá)En1的ENF細(xì)胞和用短發(fā)夾RNA（shRNA）進(jìn)行En1敲降的ENF細(xì)胞進(jìn)行比較，結(jié)果表明En1調(diào)節(jié)一系列與皮膚纖維化有關(guān)的基因。
皮膚成纖維細(xì)胞中的Engrailed-1激活導(dǎo)致疤痕形成，圖片來(lái)自Science, 2021, doi:10.1126/science.aba2374。
在愈合的傷口中，通過(guò)維替泊芬（verteporfin）抑制YAP，阻斷En1激活，可促進(jìn)ENF細(xì)胞介導(dǎo)的修復(fù)，在30天內(nèi)實(shí)現(xiàn)皮膚再生，并伴隨功能性毛囊和皮脂腺的恢復(fù)。對(duì)疤痕和再生皮膚的定量比較表明，YAP抑制誘導(dǎo)恢復(fù)正常的真皮超微結(jié)構(gòu)，進(jìn)而使得正常的機(jī)械斷裂強(qiáng)度得到恢復(fù)。白喉毒素介導(dǎo)的出生后表達(dá)En1的成纖維細(xì)胞的剔除和針對(duì)成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因YAP敲除同樣促進(jìn)了正常皮膚結(jié)構(gòu)的恢復(fù)，這表明對(duì)En1激活的調(diào)控，無(wú)論是直接方式還是間接方式，都能導(dǎo)致傷口再生。
綜上所述，通過(guò)揭示物理刺激如何引起ENF細(xì)胞促進(jìn)皮膚纖維化，這些作者確定了YAP和En1是預(yù)防疤痕的潛在分子靶點(diǎn)。此外，他們發(fā)現(xiàn)，抑制YAP信號(hào)可以防止En1在傷口愈合過(guò)程中的激活，從而促進(jìn)ENF細(xì)胞介導(dǎo)的傷口修復(fù)而不發(fā)生皮膚纖維化，在此過(guò)程中還會(huì)再生毛囊和皮脂腺。這些研究結(jié)果表明，如果可以阻斷機(jī)械驅(qū)動(dòng)的皮膚纖維化傾向，出生后哺乳動(dòng)物皮膚中殘留的ENF細(xì)胞仍有能力實(shí)現(xiàn)皮膚再生。他們證實(shí)出生后哺乳動(dòng)物的皮膚傷口可完全實(shí)現(xiàn)再生性愈合，而不會(huì)留下疤痕。這一發(fā)現(xiàn)對(duì)每年數(shù)以千萬(wàn)計(jì)出現(xiàn)疤痕和其他纖維化的患者具有臨床轉(zhuǎn)化方面的意義。
參考資料：
Shamik Mascharak et al. Preventing Engrailed-1 activation in fibroblasts yields wound regeneration without scarring. Science, 2021, doi:10.1126/science.aba2374.
Piotr Konieczny et al. Healing without scarring. Science, 2021, doi:10.1126/science.abi5770.
